? ? ? ? ? G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）是一個(gè)龐大的細(xì)胞表面跨膜受體家族，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)800多個(gè)成員，參與多種生命活動(dòng)以及內(nèi)分泌與代謝等多種生理過程，同時(shí)，與糖尿病、心臟病、腫瘤、免疫疾病等重要疾病的發(fā)生、發(fā)展及治療密切相關(guān)。基于GPCR在生理病理過程的重要生物作用，這個(gè)蛋白家族目前已經(jīng)成為最重要的藥物作用靶標(biāo)庫(kù)。目前市場(chǎng)上對(duì)GPCR的篩選方法眾多，包括同位素標(biāo)記法、熒光標(biāo)記法、抗體標(biāo)記法等等。其中β-lactamase檢測(cè)法在高內(nèi)涵高通量篩選中得到廣泛使用。β-lactamase檢測(cè)法的原理如圖所示，細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)含有NFAT反應(yīng)元件或cAMP反應(yīng)元件的β-內(nèi)酰胺酶報(bào)道基因（bla）。在沒有 β-內(nèi)酰胺酶活性的條件下，409 nm 激發(fā)完整 CCF4 分子，香豆素（藍(lán)色）會(huì)使熒光共振能量轉(zhuǎn)移至熒光素（綠色），使熒光素發(fā)出 520 nm 的綠色熒光信號(hào)。如果存在 β-內(nèi)酰胺酶活性，CCF4會(huì)被切割，使兩種染料分開并干擾熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET)，此時(shí)如果用 409 nm 的光激發(fā)香豆素，產(chǎn)生的將是 447 nm 的藍(lán)色熒光信號(hào)。這些熒光信號(hào)的變化可用熒光顯微鏡或高內(nèi)涵高通量系統(tǒng)觀察分析。銳博生物利用高內(nèi)涵高通量篩選系統(tǒng)結(jié)合β-lactamase，檢測(cè)法可以進(jìn)行GPCR活性分析和相關(guān)藥物的篩選。
檢測(cè)特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
? ? ? ? ?活細(xì)胞水平的檢測(cè)； 檢測(cè)背景低：時(shí)間分辨熒光的檢測(cè)方式，沒有熒光染料自身的交叉干擾和來自樣品自發(fā)熒光的干擾； 實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠：FRET技術(shù)使檢測(cè)結(jié)果反映的是真正的受體聚集，而不是僅僅相互靠近； 不需要抗體：Tag-lite利用最新的SNAP技術(shù)，不需要抗體來確定實(shí)驗(yàn)的特異性。
應(yīng)用領(lǐng)域
? ? ? ? ?受體二聚化/寡聚化分析； 孤兒受體的研究。
